{"id":5378,"date":"2025-11-30T16:04:20","date_gmt":"2025-11-30T15:04:20","guid":{"rendered":"https:\/\/www.pedagogie.ac-nice.fr\/svt\/?p=5378"},"modified":"2025-11-30T16:04:20","modified_gmt":"2025-11-30T15:04:20","slug":"une-electrophorese-de-substitution-pour-etudier-la-drepanocytose","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.pedagogie.ac-nice.fr\/svt\/?p=5378","title":{"rendered":"Une \u00e9lectrophor\u00e8se de substitution pour \u00e9tudier la dr\u00e9panocytose"},"content":{"rendered":"

par Adeline Gigliano
\nadjointe technique principal de recherche et de formation
\nATRFP1
\n<\/em><\/p>\n

Introduction<\/h2>\n

Dans l\u2019enseignement de sp\u00e9cialit\u00e9 de premi\u00e8re, lorsqu’on aborde la relation entre g\u00e9notype et ph\u00e9notype en prenant l’exemple de la dr\u00e9panocytose, l\u2019\u00e9lectrophor\u00e8se des h\u00e9moglobines<\/strong> est un passage oblig\u00e9 d\u00e8s que l\u2019on veut d\u00e9passer le simple r\u00e9cit clinique pour entrer dans le lien g\u00e9notype-ph\u00e9notype.<\/p>\n

En pratique pourtant, il est rarement possible de manipuler de \u00ab vrais \u00bb s\u00e9rums d\u2019individus pour des raisons \u00e9videntes de s\u00e9curit\u00e9, de logistique et de r\u00e9glementation. D\u2019o\u00f9 le succ\u00e8s des \u00e9lectrophor\u00e8ses de substitution, qui permettent de simuler la s\u00e9paration de mol\u00e9cules gr\u00e2ce \u00e0 de simples colorants.<\/p>\n

Ces montages ont toutefois un d\u00e9faut r\u00e9current que les \u00e9l\u00e8ves rep\u00e8rent vite, m\u00eame sans le formuler en ces termes : le caract\u00e8re tr\u00e8s \u00ab artificiel \u00bb des r\u00e9sultats. Les m\u00e9langes de colorants de couleurs diff\u00e9rentes produisent des profils spectaculaires mais peu r\u00e9alistes par rapport \u00e0 une v\u00e9ritable \u00e9lectrophor\u00e8se d\u2019h\u00e9moglobines<\/strong>, o\u00f9 les bandes r\u00e9v\u00e9l\u00e9es pr\u00e9sentent toutes la m\u00eame teinte. On se retrouve alors avec un r\u00e9sultat qui certes aide \u00e0 faire passer l\u2019id\u00e9e g\u00e9n\u00e9rale de migration diff\u00e9rentielle, mais au prix d\u2019une repr\u00e9sentation trompeuse du r\u00e9sultat attendu.<\/p>\n

Le protocole pr\u00e9sent\u00e9 dans cet article s\u2019inscrit dans cette logique de substitution, tout en cherchant \u00e0 en limiter les d\u00e9rives. Il propose d\u2019utiliser un m\u00e9lange de deux colorants rouges dont les mobilit\u00e9s \u00e9lectrophor\u00e9tiques diff\u00e8rent l\u00e9g\u00e8rement<\/strong>, afin de simuler les profils d\u2019\u00e9lectrophor\u00e8se d\u2019individus homozygotes HbA\/\/HbA ou HbS\/\/HbS et h\u00e9t\u00e9rozygotes HbA\/\/HbS. On conserve ainsi les avantages des colorants alimentaires ou de laboratoire en termes de s\u00e9curit\u00e9 et de co\u00fbt, tout en obtenant des bandes d\u2019une couleur unique, plus proches visuellement d\u2019un profil r\u00e9el.<\/p>\n

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Protocole (fiche laboratoire)<\/h2>\n

Pr\u00e9paration des colorants<\/h3>\n

Nous utilisons deux colorants rouges ayant des mobilit\u00e9s \u00e9lectrophor\u00e9tiques diff\u00e9rentes : le rouge Ponceau et le colorant alimentaire E124.<\/p>\n

Clin d\u2019\u0153il aux pratiques de laboratoire : dans une v\u00e9ritable \u00e9lectrophor\u00e8se de prot\u00e9ines, le rouge Ponceau est justement utilis\u00e9 comme colorant de r\u00e9v\u00e9lation apr\u00e8s la migration, et non comme constituant de l\u2019\u00e9chantillon.<\/em><\/p>\n

Le rouge Ponceau doit \u00eatre dilu\u00e9 (facteur de dilution 10) afin de ne pas \u00eatre trop intense par rapport au colorant alimentaire. Il est possible que nous devions effectuer quelques ajustements de dilution en fonction de la marque du colorant alimentaire utilis\u00e9.<\/p>\n

Une fois les deux colorants correctement \u00e9quilibr\u00e9s, nous les utilisons purs pour les individus homozygotes, ou m\u00e9lang\u00e9s (50 % de chaque) pour simuler le s\u00e9rum d\u2019un individu h\u00e9t\u00e9rozygote.<\/p>\n

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Pr\u00e9paration du gel<\/h3>\n

Il s’agit d’un gel de g\u00e9lose (Agar-agar) pr\u00e9par\u00e9 \u00e0 1%. Il est inutile d’utiliser une solution tampon.<\/p>\n

Pour 100 mL :<\/p>\n